第二代試管嬰兒技術(shù)又稱細胞漿內(nèi)單精子顯微注射(ISCI)，是指取出精子卵子后，用顯微注射器將男性單個精子注入女性細胞漿中，使精子與卵子被動結(jié)合形成受精卵的技術(shù)。一般二代試管嬰兒精子優(yōu)化的方法有精子洗滌法、上游法、下游法、密度梯度離心法等。期中密度梯度離心法操作容易標準化、精子回收率較高，是IVF/ICSI常用的精液標本制備方法，但是當精子濃度很低時并不適用。

二代試管精子優(yōu)化處理方法

精子洗滌法

用培養(yǎng)液稀釋精液標本，直接離心，收集沉淀的精子團。這種方法可以回收盡可能多的精子，但與死精子和其他細胞碎片混合。

上游法

上游方法是將精液和培養(yǎng)液一起孵化，使活性好的精子游到上層培養(yǎng)液中。該方法可去除精漿和精漿中抑 制受精的物質(zhì)，實現(xiàn)體外能量獲取。其優(yōu)點是操作簡單，成本低，不良反應少，顆粒大小更高，效果更低DNA精子的碎片率。

下游法

將滅活血清置于試管底部。將洗過的精子懸液輕輕放在血清上，形成界面。37歲?！娣趸眉氶L的吸管插入試管底部，吸收大部分含有活動精子的血清備用。上游法應克服重力向上游，回收率低，下游法避免了這一缺點，提高了精子的回收率。

密度梯度離心法

將精液放置在不同密度的梯度培養(yǎng)液上方。在離心過程中，由于密度不同而分離。常用的密度梯度液為上層40%和下層80%。此外，活動精子主動游動，通過梯度液在離心管底部形成柔軟的沉淀團，可獲得部分活力良好的精子，不含碎片、白細胞、非精子細胞和退化精子細胞。